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偶氮萃取柱的操作问题解析
点击次数:241 发布时间:2019-05-21
   偶氮萃取柱的操作问题解析
  1.装柱
  柱子下的活塞避免使用润滑剂,以免被淋洗剂带到产品中。干法和湿法装柱区别较小,只要能把柱子装实即可。装柱前应仔细观察固相萃取柱是否开裂,避免影响分离效果,装柱应该要适度紧密(太紧密淋洗剂流速太慢,太疏松淋洗剂流速过快)、均匀(避免样品从一侧斜着流出),避免过柱时出现大量的气泡。
  2.加样
  用少量的溶剂溶样品加样,打开活塞,待溶剂层下降至石英砂面时,再加少量的低极性溶剂,然后再打开活塞,如此三次,一般石英变成白色。加入淋洗剂后不可立即加压,等溶样品的溶剂和样品层有分开2-4cm,再加压,这样可以避免溶剂夹带样品快速下行。
  3.样品的收集
  用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡过程。如果样品与硅胶的吸附较强,样品解析较慢。这样就会出现后面的点先出,而前面的点后出的现象,这时可以采用氧化铝作固定相。另外,收集的试管大小要以样品量而定,特别是小量样品,如果用大试管,可能一根就收到了多个样品,如果都用小试管,缺点是工作量太大。
  4.最后处理
  偶氮萃取柱分离后,由于使用了大量的溶剂,其中的杂质也会积累到所需组分中,必要时进行重结晶。另外,过柱时有时会出现气泡,这可能存在两种原因:这与使用的溶剂类型有关,如果是易挥发的溶剂,如二氯甲烷等,在室温稍高的情况下,很容易出现这种现象。因此,在室温高的时候,应该选择沸点较高,挥发性相对小的溶剂。
  偶氮萃取柱的清洗:
  以5ml适当极性的溶剂洗脱吸附样品的萃取柱(常用的有纯水,缓冲液,水/有机溶剂混合液);
  以5ml适当非极性的溶剂洗脱吸附样品的萃取柱;
  以5ml去离子水/或低离子强度的缓冲液淋洗萃取柱。
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